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檢驗技術
霉菌斜面轉接培養
2021-03-16 08:27  點擊:101
 操作步驟:

一、開箱檢查:


打開包裝箱,查看斜面是否破損,菌株編號與說明書是否一致。


二、實驗準備:


仔細閱讀菌株說明書,準備2個新鮮平板或斜面。


三、器材滅菌:


斜面試管表面消毒后,轉移至生物安全柜中,管口灼燒滅菌冷卻備用。接種鋤和接種鏟在酒精燈外焰翻轉灼燒滅菌3-5分鐘,冷卻備用,冷卻后用接種鋤在斜面上相距0.5cm處切兩條平行線(與試管垂直)。


四、切分斜面:


換接種鏟在兩條平行線之間相距0.5cm處切兩條平行線(與試管平行),形成0.5cm*0.5cm的小正方形菌塊。


五、霉菌轉接:


用接種鏟挑取菌塊平放到平板或斜面(固體瓊脂表面)上(菌塊正面朝上)。轉接多個平板或斜面,重復以上操作即可。


六、完成培養:


平板正放,斜面傾斜放置于霉菌培養箱中培養。(參照菌種說明書上的培養條件設置溫度)


1) 實驗材料 


根霉,毛霉,黑曲霉,青霉,土豆瓊脂培養基,培養皿,載玻片,蓋玻片,鑷子,顯微鏡,小刀,U形管等。 


2) 實驗步驟  


1、配置培養基:根據原料用量配置土豆培養基。配置時,先急火煮沸,在溫火加熱20min,若有渾濁出現,則需過濾,然后定容。包扎土豆培養基,甘油等其他用品。滅菌后取出備用2、培養小室準備及滅菌 在培養皿底部鋪一張略小于皿底的圓形濾紙片,濾紙片上依次放上“U”形載玻片擱架、載玻片、蓋玻片-四片,蓋上皿蓋,牛皮紙包扎,于恒溫干燥箱中121℃滅菌30min烘干備用;


 2、瓊脂薄片制作:


a) 將稍微冷卻的培養基,倒在培養皿 中,做成薄平板。培養基應該要倒 得薄而均勻。注意無菌操作。


b) 用解剖刀將瓊脂薄平板切成邊長不大于1cm的瓊脂薄片


c) 用解剖刀將瓊脂薄片移至小室載玻片上(一個載玻片上方兩塊薄片)


3、取菌接種:用接種環挑取少量待觀察的霉菌孢子(霉菌菌種的表面輕輕刮取即可),接種于固體培養基邊緣,以便于霉菌生長。接種時只要將帶菌的接種環在載玻片上輕輕碰幾下即可。接種量要少,以免培養后菌絲過于稠密而影響觀察。


4、加蓋玻片:用無菌鑷子將皿內的蓋玻片蓋在瓊脂薄層上,用鑷子輕壓蓋玻片,使蓋玻片和載玻片之間的距離相當接近,但不能壓扁。蓋玻片不能緊貼載玻片,要彼此留有小縫隙,一是為了通氣,二是使各部分結構平行排列,易于觀察。


5、倒保濕劑:每皿倒入約2-3mL 20%的經滅菌處理的甘油,使皿內濾紙完全濕潤,以保持皿內濕度,蓋上皿蓋。制成載玻片濕室。

6、正置培養:將平皿置于27℃霉菌培養箱中培養一周。


7、觀察: 將培養好的載玻片取出,置于顯微鏡下直接觀察。 


3)實驗結果及分析 


實驗結果


1.根霉:菌絲無隔,有假根、匍匐菌絲。假根著生處有向上直立的孢囊梗,其頂端膨大成孢子囊,底部為半球形囊軸。


2.毛霉:孢囊梗直接由菌絲出,頂端為球形孢子囊 


3.黑曲霉:菌絲有隔,氣生菌絲分化為分生孢子梗(無隔),頂端 膨脹為球狀頂囊。


4.青霉:菌絲有隔,分生孢子梗頂端不膨大,無頂囊,多次分枝成幾輪小梗,小梗頂端長孢子。分生孢子梗呈掃帚狀。


如何讓霉菌產孢子?


一般微生物都會在逆境下產孢子,比如低溫、紫外照射等惡劣的生存條件,有的情況下,陽光照射也能促使產孢。不同的菌的產孢條件還不太一樣,要因菌而異,和培養基也有關??梢哉艺蚁嚓P資料查查產孢培養基,可以試試水瓊脂培養基(直接在水中加瓊脂、無其他營養物質)。

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